ギリシャセージ (Salvia fruticosa Mill.) 抽出物の植物化学的スクリーニングと生物学的評価

LC-Q-Orbitrap HRMS を使用したメタボローム プロファイリング

一般に、メタボローム研究では、 サルビア マイナスイオン化モードの化学種は、プラスモードの化学種よりも効率的になる傾向があります¹⁵。この研究では、MS データ分析には Compound Discoverer 2.1 ソフトウェアによって提供されるオンライン データベースとローカル データベースの使用が含まれていました。さらに、以前のメタボローム研究から収集されたデータは、 サルビア 種は収集され、大量リストに統合され、ローカルデータベースとして実装されました。合計 2704 個の物質ピークが検出されました。 S. フルティコサ マイナスイオンモード分析で抽出します。マイナー信号をフィルタリングした後 (エリア < 10)⁴）、補足表に示すように、98 個の代謝物があり、そのうち 95 個が暫定的に同定されました S1.

各抽出物の代謝物プロファイルを並べて図に示します。 1ａ．主要なグループは抽出物ごとに変化しました。水分を多く含む溶媒（SFH）で得られたものでは₂O および SF30) 最も豊富な化合物はフェノール酸でした。テルペノイド化合物の抽出効率は、これらの化合物の非極性の性質により、使用溶媒中のエタノールの増加と一致していました。さらに、4 つの異なる植物化学物質で検出された個々の植物化学物質の信号強度を示すヒート マップ S. フルティコサ 抜粋を図に示します。 1b.研究された抽出物で検出された最も多くの種類の化合物はテルペノイドの 35 化合物で、次いでフラボノイド (24 化合物)、フェノール酸および誘導体 (19 化合物)、糖類 (9 化合物)、脂肪酸、カルボン酸、未確認化合物などのその他の化合物でした。 。

ネガティブ モードの LC-Q-Orbitrap によって取得されたトータル イオン クロマトグラム (黒) と、270 nm で UV-Vis 検出器によって記録されたクロマトグラム (オレンジ) を組み合わせたものある)、4 つの異なる同定化合物の平均 MS ピーク面積値を表すヒート マップを設定 S. フルティコサ 抽出物: SFH₂O – 水抽出物。 SF30-30% エタノール抽出物; SF70-70% エタノール抽出物; SF100 – エタノール抽出物 (b）。ピークの正体については、補足表を参照してください。 S1.

2 つの最も極性の高い抽出物 (SFH) の場合₂O および SF30) フェノール酸は、総ピーク面積で最も豊富なクラスでした。このクラスは主にカフェ酸誘導体によって代表されます。化合物の保持時間 (RT) 16 前駆体イオン [MH]￣ を使用 m/z 179.03419 はコーヒー酸標準の RT と一致していました。また、特徴的な主要フラグメントも生成されました。 m/z 135.04414、二酸化炭素の損失による。化合物中に脱プロトン化された形のコーヒー酸が検出されました 40 そして 41、サゲリン酸 ([MH]￣ として同定されました) m/z 719.16210) およびロズマリン酸 ([MH]￣ at) m/z 359.0773）。ロズマリン酸の同定は、標準との比較によってさらに確認されました。同じイオンまたはその消失が化合物で観察されていた 20, 37, 39, 44, 53, 57 そして 58、文献および MS との比較によって裏付けられました。² 断片化により、サルビアフラシド ([MH]￣) として同定されました。 m/z 521.13012)、サルビアノール酸 B ([MH]￣ at m/z 717.14661)、イソサルビアノール酸 B ([MH]￣ at m/z 717.14667)、サルビアノール酸 K ([MH]￣ at m/z 555.11469)、2 つのサルビアノール酸 F 異性体 ([MH]￣ at m/z 313.07205) およびサルビアノール酸 C ([MH]â m/z 491.09863).

最も非極性の 2 つの抽出物 (SF70、SF100) の場合、テルペノイドの寄与が最も高かったのに対し、残りの抽出物では、このクラスは同定された化合物のピーク面積の合計の約 4 分の 1 を占めました。このクラスは主にジテルペノイドによって代表され、これらは研究された抽出物で同定された最も多様な非極性クラスの化合物でした。これらはほとんどがアビエタン型ジテルペノイドであり、マイナスイオン化による断片化には CO の除去が含まれることがよくありました。₂ (-44 Da)、CO (-28 Da)、H₂O (-18 Da)、・CH₃ (15Da)。化合物 59 ([MH]￣ で m/z 345.17075）および 64 ([MH]￣ で m/z 345.17100) 両方とも、二酸化炭素分子の損失に起因するイオンを表示しました (m/z 301.18097) と水分子 (m/z 283.17038 および m/z 283.17041)、ロスマノールおよびエピイソロスマノールとして同定されました。コンパウンド 69 ([MH]￣ で m/z 329.17580) は、二酸化炭素の損失 (m/z 285.16604)^12,15 続いてメチルラジカルが除去されます (m/z 270.16211）。同じ断片化パターンが化合物でも発生しました 80, 12-メトキシカルノシン酸 ([MH]￣ として同定される) m/z 345.20721) と 301.21689 および 286.19385 のフラグメント。コンパウンド 78、擬似分子イオンを含む m/z 331.19153 [MH]â は、二酸化炭素の損失とその後のイソプロピルラジカルの損失に対応するフラグメントの存在により、カルノシン酸として同定されました (m/z 287.20175 および 244.14687）。コンパウンド 70 [MH]￣ で前駆体イオンを示しました。 m/z 343.15524、特徴的なフラグメントを生成 m/z 315.16028 および m/z それぞれエチレンと二酸化炭素の損失により299.160504。それにより化合物を特定できるようになります 70 ロスマディアルのように。試験した抽出物では 2 つの五環性トリテルペノイドも検出されました。 96 そして 97、これらは暫定的にそれぞれベツリン酸とウルソール酸として同定され、([MH]￣ で準分子イオンを持つ) m/z 455.35340）。これらのトリテルペノイドの存在は、次の文献でも報告されています。 S. フルティコサ ジャッシュらによる。¹⁶.

研究された抽出物、特に水分含有量の高い抽出物 (SFH)₂O、SF30)、同定された化合物の合計ピーク面積におけるオリゴ糖と糖酸のかなりの割合も注目されました。化合物 1, 2 そして 3 これらは、多くの場合主要な輸送糖であるため、暫定的にスタキオース、ラフィノース、およびスクロースとして同定されました。 サルビア 種³¹。化合物 4～8 糖酸として分類されました。化合物の断片化パターン 6 ([MH]￣ で m/z 135.02875) と同一でした 私-トレオン酸。コンパウンド 8 ([MH]￣ で m/z 149.0081) 生成されたフラグメント m/z 72.99171、59.01249、および 87.00734 は、マイナスイオン化モードで観察できます。 私-(+)-酒石酸。

もう一つの主要な種類の植物化学物質が検出されました。 S. フルティコサ 抽出物はフラボノイドでした。このクラスに属する同定された化合物のほとんどはフラボンに割り当てられています。コンパウンド 24 保持時間、UV スペクトル、および MS/MS フラグメンテーション パターンを市販の標準のものと比較することにより、スクテラリンであることが明確に同定されました。化合物 46 そして 55 でほぼ同じ前駆体イオン [MH]￣ を示しました。 m/z 299.0563 と 299.0562。コンパウンド 46 で最も豊富なフラグメントが生成されました m/z 284.03253 および 136.98682、同様に複合 55。これらのデータは、ヒスピドゥリンまたはジオスメチンの断片化パターンと一致します。保持時間に違いがあるため、両方の化合物が存在する可能性があります。 S. フルティコサ 抜粋します。コンパウンド 49 [MH]￣ で前駆体イオンを示しました。 m/z 特定のプロダクトイオンを形成した 285.04065 m/z 133.02834、151.00261、175.03903、Velamuriらによってルテオリンについて報告されたものと一致しています。¹⁷。コンパウンド 52 ([MH]￣ で m/z 327.21786）は、このフラボンが以前に報告されているため、サルビゲニン（ペクトリナリゲニン-7-メチルエーテル）として同定されました。 S. フルティコサ。コンパウンド 54 でベースピーク [MH]￣ が得られました。 m/z 269.04578。プリカーサーイオンとプロダクトイオン m/z 117.03332 および 151.00264 により、この化合物がアピゲニンであることが確認されました。コンパウンド 56 で前駆体イオン [MH]￣ を与えました。 m/z 329.0668、その分子式は C であることを示します₁₇H₁₄○₇。それは顕著なフラグメントイオンを生成しました m/z 299.01981 は 2 つのメチル基の喪失に起因し、271.02472 は一酸化炭素のさらなる除去に起因します。したがって、このピークはジャセオシジンであると同定された。コンパウンド 60 の前駆体イオン [MH]￣ に基づいてシシマリチンであると同定されました。 m/z 313.07190 および診断製品イオンは次のとおりです。 m/z 298.04694 と 283.02478 は、一酸化炭素の除去による 2 つのメチルラジカルと 255.02974 の損失を示します。コンパウンド 62 ([MH]￣ で m/z 283.06137) のフラグメントを考慮すると、アピゲニン誘導体に相当します。 m/z 268.03772 および 117.03318。特徴的なフラグメントイオン m/z 240.04193は一酸化炭素の損失により形成され、化合物が生成される 62 ゲンクワニンと特定される。アピゲニン、ヒスピジュリン、シルシマリチン、ゲンクワニンの断片化パターンは、Koutsoulasらによって報告されたものと一致していた。¹²。コンパウンド 50 研究された抽出物で検出された唯一の種類のフラボノール アグリコンでした。プリカーサーイオン [MH]￣ を使用すると、 m/z 315.0513 および主要な MS/MS フラグメントは次のとおりです。 m/z メチル基の喪失から生じる 300.02756 から、この化合物はイソラムネチンとして同定されました。コンパウンド 30 擬似分子イオン [MH]￣ を使用して m/z 609.18329 では断片化は見られませんでしたが、以前に報告されていたため、 S. フルティコサ^18,19、それは暫定的にフラバノン-ヘスペリジンとして特定されました。この研究で見つかったフラボノイド配糖体は、主に 162 Da の特徴的なフラグメントを持つグルコシド、グルクロニド (176 Da) およびルチノシド (308 Da) でした。ルテオリングルコシド（化合物） 22 [MH]￣ で m/z 447.09344) の化学組成に関するほとんどの出版物に記載されています。 S. フルティコサ 抜粋^{12,18,19,20,21}。コンパウンド 26 で前駆体イオン [MH]￣ を示しました。 m/z 491.0836 であり、イソラムネチン グルクロニドとして特定されました。 S. フルティコサ Gürbüzらによるもののみ。²²。コンパウンド 27 ([MH]￣で m/z 577.15668）、アピゲニン-ルチノシドとして同定されたものは、Cvetkovikらによってギリシャのセージからも発見されました。²¹.

脂肪酸の存在も確認されました。 S. フルティコサ 抜粋します。化合物 63 そして 73 暫定的に 2 つの多価不飽和脂肪酸として同定されました。コンパウンド 63 ジヒドロキシオクタデカジエン酸 (C₁₈H₃₁○₄￣)。コンパウンド 73 前駆体イオン [MH]￣ が生成されました。 m/z 295.22803 と特徴的な断片 メートル/z 277.21738 ([MHH₂お]⁻ および 195.13837 [M-(CHO-(CH₂)₄-CH₃)-H]￣、炭素原子 13 番目のヒドロキシル基の位置を示します。したがって、それは 13-ヒドロキシ-9,11-オクタデカジエン酸であると同定されました。また、 S. フルティコサ ツベロン酸のグルコシドの存在を抽出します (m/z 387.16644) (コンパウンド 14）成長ホルモンであることが観察されました。

主要な植物化学物質の定量分析

さまざまな抽出物中の主なフェノール化合物の定量化 S. フルティコサ 植物材料の乾燥重量（mg/g DW）を表に示します。 1。コーヒー酸、スクテラリン、サルビアノール酸 B、ロスマリン酸、カルノシン酸、およびカルノソールの含有量は、本物の標準の検量線に基づいて計算され、他の化合物の含有量は、最も類似した入手可能な標準との関係で推定されました。

全体として、セージ抽出物に最も豊富に含まれる化合物はロズマリン酸で、これはフェノール酸であり、カフェ酸の二量体です。試験したすべてのサンプルの中で最高のロズマリン酸濃度は SF70 (31.56 ± 1.88 mg/g DW) で見つかりました。これは、SF70 のロズマリン酸濃度と同様です。 S. フルティコサ クロアチアから収集されたもの (29.10 ± 0.21 mg/g DW)、Mervić らによって報告されました。²³。 Sarrouらによって研究されたギリシャのセージの品種からのメタノール抽出物では、さらに高い含有量(60.73 mg/g DW)が報告されました。¹⁹しかし、この研究では溶媒として純粋なアルコールを使用しても、最高のロスマリン酸収率は得られませんでした。輸液中のロズマリン酸濃度（SFH）₂O) は他の抽出物よりもはるかに低かった (4.96 ± 0.65 mg/g DW)。これは、トルコ産の品種について行われた同様の比較の結果と一致しません。 S. フルティコサ by テキン¹⁸。コーヒー酸は、研究したすべての抽出物からも同様の濃度（0.13～0.15 mg/g DW）で検出されましたが、これは Mervić らの報告よりも 10 分の 1 低かったです。²³。しかし、セージ植物の主要なカフェ酸由来三量体に属するサルビアノール酸は、より多量に存在するものはほとんどありませんでした。最高濃度のサルビアノール酸 B は、SF70 および SF30 抽出物で得られました (6.86 ± 0.93 mg/g DW および 6.52 ± 0.48 mg/g DW)。サルビアノール酸 K は ST30 抽出物中に最も豊富で、濃度は 6.25 ± 1.0 mg/g DW でした。 Cvetkovikらによって提示されたデータによると、²¹、研究されたいくつかのギリシャ人集団におけるサルビアノール酸 K の最大濃度 S. フルティコサ ７．２０ｍｇ／ｇＤＷであった。

最も豊富なテルペノイド化合物 S. フルティコサ カルノシン酸とカルノソールは、どちらもアビエタン ジテルペノイドのファミリーに属します。¹²。カルノシン酸の含有量が最も高かったのは SF100 (14.82 ± 1.66 mg/g DW) で、次いで SF70 (13.88 ± 2.52 mg/g DW) でしたが、統計的には違いがありません。これらの結果は、Kallimanis らによって測定されたメタノール抽出物の含有量と一致しています。²⁴ これは 12.5 ± 1.6 mg/g DW でした。 SF70 抽出物中のカルノソールの量は 7.88 ± 1.33 mg/g DW であり、これは Sarrou らによって報告されたこれと一致していました。¹⁹。研究された抽出物中で 3 番目に豊富なテルペノイドであるサルビオールは、アビエタン ジテルペノイドであるフェルギノールに由来するメロテルペノイドであり、ギリシャの他の種のセージに一般的です。 S.ポミフェラ²⁵。この化合物はまだ報告されていません。 S. フルティコサ;しかし、それは研究された抽出物のほとんどに存在し、最高含量：SF70 で 7.37 ± 0.71 mg/g DW でした。

で検出された生物活性物質の 3 番目のグループ S. フルティコサ 抽出物はフラボノイドでした。スクテラリンはセージに含まれる一般的なフラボノイドの 1 つです²⁶。これは、研究された抽出物中で最も豊富なフラボノイドであり、同様の収量を示しました: SFH では 7.77 ± 0.48 mg/g DW、8.92 ± 1.56 mg/g DW、および 7.35 ± 0.9 mg/g DW₂それぞれO、SF30、SF70抽出物。ルテオリン ルチノシドとルテオリングルコシドの濃度は、研究したすべての抽出物で同様で、1.03 ～ 1.98 mg/g DW の範囲でしたが、これは Tekin らによって報告されたデータとは一致しません。¹⁸ここで、セージ注入中のこれらの化合物の濃度は、エタノール抽出物中の濃度よりも 2 ～ 3 倍高かった。

フェノール酸、フラボノイド、テルペノイドは、代表的な生理活性化合物です。 S. フルティコサ。表に示すように 1、抽出収率は溶媒中のエタノール含有量に大きく影響されました。水のみによる抽出とは対照的に、70% エタノールによる抽出では、生物活性物質の総収量が最も高くなりました。違いはフェノール酸とテルペノイドの収率にはっきりと現れており、SF70 ではそれぞれ 3 倍、7 倍高かった。フラボノイドの最大抽出収量は 30% エタノールで得られましたが、70% エタノールで得られた収量よりもわずかに高いだけでした。研究された生物活性物質のすべてのグループを考慮すると、70% エタノールが、生物活性化合物の抽出について試験された溶媒の中で最良の溶媒であると結論付けられます。 S. フルティコサ.

抗酸化作用

植物材料中に抗酸化活性を示す化合物の存在は、その健康増進特性を定義する重要な側面となっています。さまざまな種類のセージの場合、その高い抗酸化活性は主にフェノール化合物によって引き起こされます。提示された研究では、総抗酸化活性は次のように決定されました。 S. フルティコサ 異なる極性の抽出剤を使用して抽出物を調製します。さらに、セージに典型的であり、フェノール酸、フラボン、ジテルペノイドなどの二次代謝産物のさまざまなクラスに属する、選択されたフェノール化合物の抗酸化活性が測定されました。

発表された研究では、ABTS、DPPH、および Folin-Ciocalteu (F-C) 試薬を使用した 3 つの最も一般的な分光測光試験の結果を比較しました。 ABTS および DPPH アッセイは、純粋な化合物と同様に、抽出物のフリーラジカル消去活性を測定するために広く使用されています。のために S. フルティコサ 抽出物から計算された抗酸化活性は、10 分間の反応後に 1 g の乾燥材料に由来する抗酸化物質によって減少した ABTS または DPPH 分子の数を表します。これらの値はメソッドの線形範囲で計算され、還元された酸化剤のミリモル数とさまざまな量の試験サンプル (反応混合物中の乾物のグラム数) との関係を表す線の傾きとして表されました (図 1)。 2b）。

標準物質（カフェ酸、スクテラリン、サルビアノール酸 B、ロスマリン酸、カルノシン酸、カルノソール、トロロックス）の抗酸化活性と S. フルティコサ 抽出物: SFH₂O – 水抽出物。 SF30-30% エタノール抽出物; SF70-70% エタノール抽出物; ABTS、DPPH、および F-C 試薬を使用して in vitro でテストされた SF100 エタノール抽出物は、テストされた標準によって削減された試薬の依存曲線を示すプロットとして表示されます (ある) または抽出 (b) であり、試薬のミリモル数を試験サンプル 1 g で減じた値に等しい曲線の傾きとして表されます (c) ABTS によるポストカラム誘導体化後に 734 nm で登録された抽出物の抗酸化物質プロファイルを設定し、抗酸化物質の主要なクラスを円グラフに示します (d）。ピークの正体については、補足表を参照してください。 S1.

この研究には、Folin-Ciocalteu 試薬を使用した方法も含まれています。これは、アルカリ環境下で活性ヒドロキシル基を有する化合物からリンモリブデン系リンタングステン酸錯体への電子の移動からなる。この場合の還元能力は、青色錯体を形成し、植物の乾燥物 1 g に由来する没食子酸当量のミリモル数として表されました。同じアプローチが、セージに含まれるコーヒー酸、カルノシン酸、カルノソール、サルビアノール酸 B、スクテラリン、ロズマリン酸などの、セージに含まれる選択された純粋な物質に対して使用され、さらに参照抗酸化剤であるトロロックスに対しても使用されました。 2a）。植物材料および純粋な物質の抗酸化活性を決定および計算するこのような方法は、Kusznierewicz et al. によって以前に記載されています。²⁷ およびBaranowskaら。²⁸、 それぞれ。得られた傾きの値は、標準とサンプルに対して実施された各テストの別々の軸にプロットされました (図 1)。 2c)。試験した各フェノール標準物質は抗酸化活性を示し、スクテラリン < カルノソール < カルノシン酸 < サルビアノール酸 B < ロズマリン酸 < カフェ酸の順に増加しました。そのうちの 3 つ (サルビアノール酸 B、ロズマリン酸、カフェ酸) は、抗酸化活性測定アッセイで参照として一般的に使用される化合物であるトロロックスよりも効果的でした。研究されたすべての抽出物の抗酸化活性 S. フルティコサ は、ABTS アッセイおよび DPPH テストにおいて用量依存性でした。したがって、反応混合物に添加される抽出物の量が増加すると、これらのラジカルに対する還元力も増加します。総抗酸化活性はSF100抽出物で最も低く、次いでSFHではほぼ2倍高く観察されました。₂O、SF30 と SF70 ではほぼ 4 倍です。 F-C テストの結果は、ABTS および DPPH と同じ傾向に従い、ピアソン相関は 0.99 でした。これは、Lantzouraki らが実証したように、抽出物の抗酸化活性がフェノール類の含有量に大きく依存することを示しています。²⁹.

抽出物中の試験用に選択された 6 種類の植物化学物質の含有量に基づいています (表 1）およびそれらおよび抽出物について決定された抗酸化活性（図2）。 2a、c)、個々の抽出物の総抗酸化活性に対するこれらの化合物の推定寄与を決定できます。 SFHの場合₂O、SF30 および SF70 抽出物である 6 つの選択された化合物は、テストに応じて理論的には、測定された総抗酸化活性のそれぞれ 21 ～ 30%、45 ～ 63%、および 64 ～ 86% をカバーしました。これらの結果は、これらの抽出物中に他の追加の抗酸化物質が存在する可能性および/またはそれらの相乗効果を示唆しています。 SF100 抽出物の場合のみ、6 つの標準化合物の活性の合計が、使用した試験に応じて、この抽出物の決定された合計活性 (20 から 49% の範囲) を超えました。このような観察は、この種の抽出物中に存在する植物化学物質間の拮抗的相互作用の可能性の結果である可能性があります。

テストされた製品に含まれる抗酸化物質の種類に関する詳細情報 S. フルティコサ 抽出物は、ABTS 試薬を使用した HPLC ポストカラム誘導体化を使用して得られました。この方法で得られた抗酸化物質のプロファイルと、総抗酸化活性におけるさまざまな種類の抗酸化物質の寄与を図に示します。 2d.以前にテストした6つの標準的な抗酸化物質に加えて、 S. フルティコサ 抽出物には、プルゼワルスキン酸 A、サルビアフラシド、ルテオリン ルチノシド、ルテオリングルコシド、イソラムネチン グルクロニド、クマロイル カフェオイルグリコシド、サルビアノール酸 K、サルビアノール酸 F などの他の抗酸化物質も含まれていました。 ABTS ラジカルは SF70 および SF30 抽出物で観察されました。これら 2 つのサンプルの抗酸化プロファイルは類似しているにもかかわらず、共通のシグナルの強度は SF70 の方が高く、ジテルペノイドに由来する追加の活性も認められました。 SF70 および SF100 抽出物のプロファイルでのみ、ジテルペノイドに由来する負のピークが観察され、それぞれ 15 および 34% での総抗ラジカル活性におけるそれらのシェアが認められました。エタノールを含むすべての抽出物に含まれる主な抗酸化物質はロズマリン酸でした。ロズマリン酸は最も豊富なフェノール酸であり、研究された標準物質の中で最も強力な抗酸化物質の 1 つです。についても同様の結果が報告されました S.オフィシナリス そして 南ヒスパニカ 抜粋^30,31.

水性抽出物 (SFH)₂O) 水のみによるロスマリン酸抽出は効果が低いため、抗酸化活性は主に 2 つの化合物、プゼワルスキン酸 A とスクテラリンに由来します。

キサンチンオキシダーゼ阻害活性

酵素キサンチンオキシダーゼ (XO) は、ヒポキサンチンとキサンチンの尿酸への酸化を触媒し、血液中の過剰な尿酸は痛風の発症を引き起こします。 XO の再酸化中、酸素分子は電子受容体として作用し、スーパーオキシドラジカルと過酸化水素を生成します。その結果、XO は、他の活性酸素種とともに体の酸化ストレスに寄与し、炎症、アテローム性動脈硬化、癌、老化などの多くの病理学的プロセスに関与するスーパーオキシドラジカルの重要な生物学的供給源であると考えられています。³²。高尿酸血症の治療に対する最近の治療法は、XO 酵素を阻害することです。 XO阻害剤（アロプリノール、フェブキソスタット）を含むさまざまな薬剤が開発されていますが、残念ながらその使用には特定の副作用が伴います。このため、これらの合成化合物の代替となる天然の XO 阻害剤が常に探索されています。いくつかの種の能力についてのいくつかの報告が文献にあります。 サルビア (S. plebeia、S. miltiorrhiza、S. verbenaca）XOを阻害する^33,34,35したがって、この活動の発生の可能性も研究対象でテストされました。 S. フルティコサ 抜粋します。さらに、カフェ酸、カルノシン酸、カルノソール、サルビアノール酸 B、スクテラリン、ロズマリン酸、さらに参考までに、XO 阻害剤アロプリノールなど、セージに典型的な選択されたフェノール化合物でも XO 阻害活性が測定されました。

試験サンプルの存在の有無にかかわらず、XO によるキサンチン (基質) から尿酸 (生成物) への変換を、285 nm で HPLC-PAD を使用してモニタリングしました (図 1)。 3a）。酵素活性は、サンプルを添加しない対照と比較した、試験サンプルの存在下で形成された尿酸ピーク面積のパーセンテージとして計算されました（図1）。 3b）。 XO 酵素の阻害は IC として表されました。₅₀ 値は、酵素活性を 50% まで低下させることができるサンプルの標準重量または乾燥重量 (μg) の質量を意味します (図 3紀元前）。

以下を含む反応後混合物の 285 nm での HPLC クロマトグラムの例 (上から): キサンチン;キサンチンおよびキサンチンオキシダーゼ (XO);キサンチン、XO および阻害剤 (ある)、これらは、試験した標準物質 (カフェ酸、スクテラリン、サルビアノール酸 B、ロスマリン酸、カルノシン酸、カルノソールおよびアロプリノール) の存在下での XO 活性の曲線を表すプロットを作成するための基礎となりました。 S. フルティコサ 抽出物 (SFH₂O – 水抽出物。 SF30-30% エタノール抽出物; SF70-70% エタノール抽出物; SF100 – エタノール抽出物) (b)、パラメータ IC を決定するために使用されました。_50, これは、XO 活性を 50% に低下させるのに必要な検査サンプルのマイクログラムを意味します (c).

既知の XO 阻害剤アロプリノールを基準として使用し、IC を使用しました。₅₀ 値は 0.15 μg (5.5 μM)。研究されたすべての標準物質は、IC による XO 阻害活性を示しました。₅₀ 0.1 ～ 3.15 μg (2.8 ～ 43.8 μM) の範囲です。 XO阻害活性は、ロズマリン酸 < カルノシン酸 < スクテラリン < サルビアノール酸 B < カルノソール < カフェ酸の順に増加しました。コーヒー酸は最も低いICを示しました₅₀ 値 (0.1 μg; 2.8 μM) は、試験した化合物の中で最も強い XO 阻害活性を示します。それはアロプリノールよりもさらに強力でしたが、これはWanらによって提示されたデータと一致しません。³⁶ およびFlemmigら。³⁷, ここで、IC₅₀ カフェ酸の濃度は、それぞれアロプリノールのほぼ 8 分の 1 または 2 分の 1 でした。これらの違いは、テスト用に選択された XO の起源に起因する可能性があります。引用された研究では牛乳由来のオキシダーゼが使用されましたが、この研究では微生物オキシダーゼが選択されました。この研究では、ロズマリン酸の XO 阻害力が最も低かった (3.2 μg; 43.8 μM) が、Ghallab et al.³⁸ アロプリノールとロスマリン酸の相乗的な組み合わせにより、必要な合成薬物の投与量を減らすことができると報告しました。 XOは研究されたすべての物質で阻害された S. フルティコサ 抽出物は、アロプリノールよりも効果が 1000 分の 1 以上低いものの、他の研究で報告されたデータと一致しています。 サルビア 種。スクテラリンおよび他のフラボンは、XO の強力な阻害剤として以前に記載されています。³⁹。 SF30 抽出物と SF70 抽出物の総フラボノイド含有量にはわずかな差しかなく、他の抗炎症化合物の含有量は SF70 抽出物の方が有利であるにも関わらず、SF30 は XO 活性を阻害する最も強力な能力を持っていました。 IC₅₀ SF30 の値は 50 μg であり、このパラメーターに基づいて、SF70、SF100、および SFH の潜在的な抗炎症活性が決まりました。₂O 抽出物はそれぞれ 3、4、5 倍弱いと測定されました。